ATP5B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401009-ACT

ATP5B codifica a subunidade beta da ATP sintase mitocondrial (Complexo V), um componente catalítico central do setor F1 que acopla a força próton-motriz à produção de ATP durante a fosforilação oxidativa. Ao sustentar a bioenergética celular e a manutenção do potencial de membrana mitocondrial, o ATP5B influencia processos como a homeostase de espécies reativas de oxigênio, a suscetibilidade à apoptose e a adaptação metabólica. Alterações na expressão ou na função de subunidades da ATP sintase, incluindo ATP5B, têm sido associadas a fenótipos de disfunção mitocondrial observados em neurodegeneração, estresse cardiometabólico e reprogramação metabólica relacionada ao câncer, tornando-o um marcador frequentemente avaliado em estudos de biologia mitocondrial. Assim, o ATP5B é comumente investigado em vias que conectam a atividade da cadeia de transporte de elétrons à demanda de ATP, ao controle de qualidade mitocondrial e à sinalização de resposta ao estresse.

ATP5B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ATP5B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ATP5B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ATP5B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ATP5B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ATP5B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ATP5B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ATP5B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ATP5B em células tumorais com expressão de ATP5B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.