Atg13CRISPR激活质粒(h2): sc-404702-ACT-2
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Atg13 CRISPER激活质粒（h2）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- Atg13 CRISPR 激活质粒 (h2)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 Atg13 CRISPR 激活质粒 (h2) 和 Atg13 CRISPR 激活质粒 (h22) 编码的 gRNA 分别针对 ATG13 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
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Atg13CRISPR激活质粒(h2) | sc-404702-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
人类ATG13基因编码Atg13蛋白，它是ULK1起始复合体的核心组成部分，负责整合来自mTORC1和AMPK的营养与能量信号，从而触发自噬体的形成；Atg13通过与ULK1/2、FIP200/RB1CC1以及ATG101相互作用，协调自噬早期事件和隔离膜（phagophore）的成核过程，进而维持蛋白质稳态、细胞器质量控制与应激适应；ATG13依赖的自噬若发生失调，已被认为与肿瘤生物学、神经退行性变以及炎症信号等相关通路有关，因为自噬通量的改变会影响细胞生存与先天免疫反应；对ATG13进行基因编辑可用于开展自噬起始机制研究、绘制信号串扰图谱，并进行功能基因组学筛选，以在人类细胞模型中定量评估自噬通量、应激敏感性及通路依赖性。
Atg13 CRISPR激活质粒（h2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ATG13的表达。
Atg13 CRISPR激活质粒（h2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ATG13基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ATG13转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Atg13表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ATG13位点，并能够研究内源性位点上依赖于Atg13的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ATG13表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Atg13通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。