Ataxin-10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406001-ACT

ATXN10 codifica a ataxina-10, uma proteína citoplasmática implicada na coordenação da organização do citoesqueleto e da dinâmica de membranas, com funções descritas na homeostase neuronal e nas respostas ao estresse celular. A ataxina-10 tem sido associada a processos de sinalização que influenciam a morfologia e a sobrevivência celular, incluindo vias que se cruzam com a remodelação de actina e o tráfego intracelular. A desregulação de ATXN10 está associada a fenótipos neurodegenerativos, e a expansão de repetições no locus ATXN10 está ligada à ataxia espinocerebelar tipo 10, sustentando sua relevância para o estudo de mecanismos de vulnerabilidade neuronal. Como resultado, ATXN10 é frequentemente investigado em modelos de neurobiologia, sinalização celular e relações genótipo–fenótipo.

Ataxin-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ATXN10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ataxin-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ATXN10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ATXN10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ataxin-10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ATXN10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ataxin-10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ataxin-10 em células tumorais com expressão de ATXN10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.