ASXL1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401252-LAC

ASXL1 (additional sex combs like 1) codifica un regolatore associato alla cromatina che interagisce con i programmi Polycomb/Trithorax per modulare gli stati trascrizionali durante lo sviluppo e la differenziazione ematopoietica. La proteina ASXL1 contribuisce al controllo epigenetico attraverso interazioni con complessi che modificano gli istoni, plasmando l’attività di enhancer e promotori e influenzando l’espressione genica specifica di linea. L’alterazione della regolazione della cromatina dipendente da ASXL1 può modificare i percorsi di autorinnovamento e differenziazione, inclusi quelli che governano la maturazione mieloide e le decisioni di destino delle cellule staminali/progenitrici. ASXL1 è frequentemente studiato nel contesto di mutazioni associate a neoplasie mieloidi e di una più ampia disregolazione epigenetica, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sul controllo trascrizionale.

Le particelle di attivazione lentivirale ASXL1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ASXL1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ASXL1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ASXL1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ASXL1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ASXL1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.