Plasmide CRISPR d'Activation (h) ASXL1: sc-401252-ACT

ASXL1 humain (additional sex combs like 1) est un régulateur associé à la chromatine qui s’articule avec les mécanismes des groupes Polycomb et Trithorax pour façonner des programmes transcriptionnels gouvernant la différenciation hématopoïétique, l’auto-renouvellement des cellules souches et l’engagement de lignée. ASXL1 participe au contrôle épigénétique de l’expression génique via des interactions avec des complexes de modification des histones, influençant l’accessibilité de la chromatine et les réseaux de signalisation du développement. La perturbation de la fonction d’ASXL1 est fréquemment associée à des états épigénomiques altérés et à une dérégulation transcriptionnelle observés dans les hémopathies malignes myéloïdes et les phénotypes apparentés d’insuffisance médullaire. Ces caractéristiques font d’ASXL1 un nœud pertinent pour étudier le remodelage de la chromatine, le contrôle transcriptionnel et les transitions d’états cellulaires liées aux maladies.

ASXL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ASXL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ASXL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ASXL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ASXL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ASXL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ASXL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ASXL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ASXL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ASXL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.