ASPP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423473

概要

Ppp1r13bはASPP1をコードしており、ASPP1はp53ファミリー転写因子のDNA結合ドメインに結合して、その活性をアポトーシス促進性の標的遺伝子へと偏らせるアポトーシス誘導タンパク質である。ASPP1はp53/p63/p73依存的な転写を調節することで、ストレス誘導性アポトーシス、細胞周期制御、ゲノム完全性の維持に寄与する。ASPP1の機能はDNA損傷応答シグナル伝達や、細胞運命決定を形作る転写共調節因子ネットワークとも交差している。この軸の制御異常は、アポトーシスやチェックポイント制御の破綻が疾患関連の細胞表現型に関与する腫瘍生物学をはじめとするさまざまな病態と関連する。

ASPP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpp1r13b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppp1r13b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppp1r13bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ASPP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ASPP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppp1r13b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ASPP1の機能に不可欠なPpp1r13bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppp1r13bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ASPP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびASPP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppp1r13b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ASPP1 HDRプラスミド（m）および ASPP1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpp1r13bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpp1r13b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。