ASM CRISPR 활성화 플라스미드(m): sc-423033-ACT
- Target species: mouse
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- ASM CRISPR Activation Plasmid (m) 는 synergistic activation mediator (SAM) transcription activation system으로 특정유전자 발현을 upregulate하도록 디자인되였습니다.
- ASM CRISPR 활성화 플라스미드(m)는 1:1:1의 질량 비율로 3개의 플라스미드로 구성되어 있습니다: 비활성화된 Cas9(dCas9) 뉴클레아제(D10A 및 N863A)를 트랜스활성화 도메인 VP64에 융합한 플라스미드와 블라스티시딘 저항 유전자; MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 코딩하는 플라스미드와 하이그로마이신 저항 유전자; 표적 특이적인 20nt 가이드 RNA가 두 개의 MS2 RNA 아파테머에 융합되어 있고, 푸로마이신 내성 유전자
- The resulting SAM complex binds to a site-specific region approximately 200-250 nt upstream of the transcriptional start site and provides robust recruitment of transcription factors for highly efficient gene activation
- ASM CRISPR 활성화 플라스미드 (m) 및 ASM CRISPR 활성화 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Smpd1 전사 개시점 상류의 서로 다른 조절 영역을 표적으로 합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 사용할 수 있습니다
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
ASM CRISPR 활성화 플라스미드(m) | sc-423033-ACT | 20 µg | $397.00 |
마우스 Smpd1은 산성 스핑고미엘리나아제(ASM)를 암호화하며, ASM은 스핑고미엘린을 세라마이드와 포스포릴콜린으로 전환하는 리소좀 가수분해효소로서 스핑고지질의 대사 회전과 막 리모델링을 조절한다. ASM 의존적 세라마이드 생성은 엔도리소좀 기능, 자가포식-리소좀 간 상호작용, 그리고 염증 및 세포사멸과 연관된 스트레스 반응성 신호전달 경로에 영향을 미친다. ASM 활성의 교란은 지질 항상성을 무너뜨리고 스핑고미엘린 축적을 촉진하는데, 이는 리소좀 축적 질환 병리와 수초 및 면역세포 기능 변화의 특징적 소견이다. 생의학 연구에서 Smpd1/ASM은 리소좀 생물학, 세라마이드 매개 신호전달, 그리고 지질 대사가 신경퇴행 및 대사 스트레스와 연결되는 기전을 규명하는 데 활용된다.
ASM CRISPR 활성화 플라스미드(m)는 기본 DNA 서열을 변경하지 않고 내인성 Smpd1 발현을 상향 조절하는 표적화된 비파괴적 접근법을 제공합니다.
ASM CRISPR 활성화 플라스미드(m)는 인간 세포주에서 Smpd1 유전자좌의 고효율, 위치 특이적 전사 상향 조절을 위해 설계된 3개의 플라스미드로 구성된 시너지 활성화 매개체(SAM) 시스템입니다. 이 시스템은 DNA 결합 능력은 유지하면서 뉴클레아제 활성을 제거하는 두 가지 비활성화 돌연변이(D10A 및 N863A)를 지닌 촉매 활성 없는 Cas9(dCas9)을 중심으로 구축되었습니다. 이 dCas9은 강력한 전사 활성화제인 VP64와 융합되어 있으며, 선별을 위해 블라스티시딘 내성 유전자와 함께 발현됩니다. 두 번째 플라스미드는 dCas9-VP64와 협동하여 작용하는 2차 활성화 복합체인 MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 암호화하며, 히그로마이신 내성 유전자와 함께 존재한다. 세 번째 플라스미드는 표적 특이적 20nt sgRNA를 암호화하며, 이는 MS2-p65-HSF1 복합체를 활성화 부위로 유인하는 두 개의 MS2 RNA 아파타머와 융합되어 있으며, 푸로마이신 내성 유전자가 함께 포함되어 있습니다. 세 플라스미드는 모든 시스템 구성 요소의 균형 잡힌 발현을 위해 질량비 1:1:1로 전달됩니다.
표적 부위에 조립되면 SAM 복합체는 Smpd1 전사 시작점의 상류 약 200bp 지점에 결합하며, 이곳에서 VP64, p65 및 HSF1이 협력하여 전사 기구를 모집하고 내인성 ASM 발현의 상향 조절을 유도합니다. 핵산분해 활성을 가진 Cas9과 달리, dCas9은 이중 가닥 절단을 유발하거나 게놈 서열을 변형시키지 않아, 원형 Smpd1 위치를 보존하고 내인성 위치에서 ASM 의존적 전사 반응을 연구할 수 있게 하여, 기능 연구, 표적 유전자 식별 및 Smpd1 발현이 침묵되거나 감소된 종양 세포에서 ASM 경로 복원을 모델링하는 데 유용한 도구입니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.