ASL Plasmide Double Nickase (h): sc-403083-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ASL Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ASL Double Nickase Plasmid (h) e il ASL Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ASL. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ASL Antibody (B-1): sc-166787
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ASL Plasmide Double Nickase (h) | sc-403083-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ASL Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403083-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ASL umano codifica l’argininosuccinato liasi, un enzima citosolico che catalizza la scissione reversibile dell’argininosuccinato in arginina e fumarato, collegando il ciclo dell’urea al metabolismo energetico cellulare attraverso il ciclo dell’acido citrico (TCA). Sostenendo l’eliminazione dell’azoto e la disponibilità di arginina, ASL influenza l’omeostasi degli amminoacidi e la biologia a valle dell’ossido nitrico tramite effetti sull’apporto di arginina. L’attività di ASL è centrale nella detossificazione epatica dell’ammoniaca e in una più ampia coordinazione metabolica tra i tessuti. L’alterazione della funzione di ASL è associata a disfunzione del ciclo dell’urea e a fenotipi metabolici correlati all’iperammoniemia, rendendola rilevante per studi meccanicistici del metabolismo dell’azoto e del crosstalk mitocondrio–citosolico.
ASL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ASL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ASL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ASL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ASL interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.