ASK 1CRISPR激活质粒(h): sc-400658-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- ASK 1 CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- ASK 1 CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 ASK 1 CRISPR 激活质粒 (h) 和 ASK 1 CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 MAP3K5 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：ASK 1: sc-5294，通过WB, IF或者IHC分析
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ASK 1CRISPR激活质粒(h) | sc-400658-ACT | 20 µg | $397.00 |
MAP3K5 编码凋亡信号调节激酶 1（ASK1），这是一种应激响应型 MAP3K，能够整合氧化应激、内质网应激、钙离子通量以及炎症信号，并通过 JNK 和 p38 MAPK 级联通路传递信号。ASK1 的活性受其与硫氧还蛋白（thioredoxin）及其他支架/接头蛋白的氧化还原依赖性相互作用所调控，从而将上游应激感知与下游 MAP2K 的磷酸化以及转录程序相耦联，进而影响凋亡、细胞因子产生和先天免疫反应。ASK1 信号失调已被认为与多种细胞损伤情境有关，尤其与神经退行性变、心代谢应激和慢性炎症等相关；在这些情况下，MAPK 输出的改变会影响细胞存活、组织重塑以及炎症基因表达。由于 ASK1 位于连接应激输入与 MAPK 效应通路的关键节点，它常被用于研究信号网络的重构以及情境依赖性的细胞命运决策。
ASK 1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MAP3K5的表达。
ASK 1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的MAP3K5基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于MAP3K5转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性ASK 1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的MAP3K5位点，并能够研究内源性位点上依赖于ASK 1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MAP3K5表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ASK 1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。