ASIC3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405106-ACT

ヒトASIC3（酸感知性イオンチャネル・サブユニット3）は、DEG/ENaCファミリーに属するプロトン作動性でアミロライド感受性のカチオンチャネルであり、細胞外の酸性化に応答して開口し、Na⁺の流入と膜の脱分極を引き起こします。ASIC3は感覚ニューロンの興奮性と密接に関わり、炎症、虚血、機械的ストレスに伴う組織pHの変化を受容して、より広範なイオン恒常性や興奮性シグナル伝達過程と統合されます。ASIC3の活性は、脱分極に駆動される経路を介して間接的にカルシウム依存性の下流シグナル伝達に影響し、侵害受容および機械感覚回路に寄与します。ASIC3の発現や機能の異常は、研究環境において、痛覚過敏、炎症反応、ならびに酸性微小環境下での神経筋・筋骨格系の生理との関連が示されています。

ASIC3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ASIC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ASIC3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ASIC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はASIC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ASIC3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のASIC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるASIC3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびASIC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるASIC3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。