ASH1L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402901-ACT

ASH1L (absent, small, or homeotic discs 1-like) codifica uma metiltransferase nuclear de lisina em histonas que deposita metilação em H3K36 para sustentar o alongamento transcricional e manter programas de expressão gênica específicos de cada tipo celular. Por meio de seus domínios leitor de cromatina e catalítico, a ASH1L ajuda a equilibrar a repressão e a ativação mediadas por Polycomb em loci do desenvolvimento, influenciando processos como a diferenciação neuronal e o comprometimento de linhagem. O controle epigenético regulado por ASH1L cruza-se com vias que governam o remodelamento da cromatina, a atividade de enhancers e a fidelidade transcricional. Variações genéticas ou a desregulação de ASH1L têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e a redes regulatórias gênicas alteradas, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos da transcrição dirigida pela cromatina.

ASH1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ASH1L sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ASH1L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ASH1L em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ASH1L, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ASH1L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ASH1L nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ASH1L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ASH1L em células tumorais com expressão de ASH1L silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.