ASCL1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402039-NIC

ASCL1（achaete-scute ファミリー bHLH 転写因子1）は、E-box モチーフに結合し、細胞周期からの離脱、神経突起の伸長、神経系への運命決定を制御する転写プログラムを協調的に調節することで、神経系譜へのコミットメントと分化を駆動するプロニューロナルな制御因子です。発生や細胞リプログラミングの文脈では、ASCL1 は Notch シグナル伝達やクロマチンリモデリングと連携し、前駆細胞の維持と分化のバランスを調整します。また、神経内分泌様の転写状態のマーカー／エフェクターとしても一般的に用いられます。ASCL1 発現の破綻は、異常な系譜可塑性や神経内分泌分化プログラムの変化と関連づけられており、神経発生および腫瘍生物学における転写回路の研究において重要です。これらの特性は、細胞運命の規定、転写因子ネットワーク、ならびにニューロン遺伝子発現のエピジェネティック制御の解明に資するものです。

ASCL1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ASCL1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ASCL1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ASCL1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ASCL1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。