ARV1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407460-ACT

ARV1 (homólogo de ARV1) codifica uma proteína evolutivamente conservada, multipasso de membrana, predominantemente localizada no retículo endoplasmático e implicada na homeostase lipídica. O ARV1 humano tem sido associado ao tráfego de esteróis e esfingolipídios, à manutenção da composição de membranas e à coordenação de processos dependentes do RE que influenciam a função da via secretória e as respostas celulares ao estresse. Por meio de seu papel na organização do equilíbrio lipídico e na dinâmica de membranas, o ARV1 pode impactar redes de sinalização acopladas à integridade de organelas e à proteostase. A perturbação da expressão de ARV1 tem sido associada a fenótipos neurodo desenvolvimento e epilépticos em estudos genéticos, sustentando sua relevância para pesquisas de mecanismos de doença em contextos metabólicos e neurológicos.

ARV1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARV1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ARV1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARV1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARV1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ARV1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARV1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ARV1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ARV1 em células tumorais com expressão de ARV1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.