Artemis CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-405295-ACT-2

ヒトのDCLRE1Cは、V(D)J組換えおよび非相同末端結合（NHEJ）におけるDNA二本鎖切断の修復に必須なDNAヌクレアーゼであるArtemisをコードしており、DNA-PK複合体と協調してヘアピン状のコーディング末端を開裂し、損傷したDNA末端を処理する。Artemisの活性は、抗原受容体遺伝子の正確な再構成を可能にするとともに、電離放射線や複製ストレスによって生じる複雑なDNA損傷を解決することで、ゲノム安定性と正常なリンパ球発生を支える。DCLRE1Cの機能喪失変異は重症複合免疫不全（SCID）や放射線過敏性と関連し、適応免疫とDNA損傷応答シグナル伝達の交差点における役割を浮き彫りにしている。DCLRE1C/Artemisを標的とした遺伝子編集や機能ゲノミクス研究は、NHEJ経路の欠陥をモデル化し、二本鎖切断修復における末端処理要件を検証するとともに、ヒト細胞における染色体再編成や免疫レパートリー形成への影響を評価するために用いられている。

Artemis CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DCLRE1Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Artemis CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における DCLRE1C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDCLRE1C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Artemisの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDCLRE1C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるArtemis依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDCLRE1C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるArtemis経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。