Arp3β Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402186-ACT

ACTR3B codifica a Arp3β, uma proteína relacionada à actina que se acredita contribuir para a remodelação dinâmica do citoesqueleto de actina, dando suporte a processos como o controle da forma celular, a formação de “ruffles” de membrana, a endocitose e a migração celular. Como parte de redes regulatórias de actina ligadas à nucleação dependente de Arp2/3 e à montagem de actina ramificada, a Arp3β pode influenciar a organização da actina cortical e as respostas do citoesqueleto a sinais de sinalização celular. A perturbação das vias de polimerização de actina é amplamente relevante para mecanismos subjacentes ao comportamento invasivo, à adesão alterada e ao tráfego intracelular desregulado observados em múltiplos contextos de doença. Assim, a expressão de ACTR3B e sua modulação funcional constituem pontos de entrada úteis para estudar fenótipos centrados no citoesqueleto e a conectividade de vias em modelos celulares humanos.

Arp3β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACTR3B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Arp3β O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACTR3B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACTR3B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Arp3β. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACTR3B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Arp3β no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Arp3β em células tumorais com expressão de ACTR3B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.