Plasmide CRISPR d'Activation (h) Arp2: sc-401018-ACT

ACTR2 code la protéine humaine apparentée à l’actine Arp2, une sous-unité centrale du complexe Arp2/3 qui nucléé des filaments d’actine ramifiés afin de remodeler le cytosquelette. La dynamique de l’actine dépendante d’Arp2/3 entraîne la formation des lamellipodes, la migration cellulaire, l’endocytose et la phagocytose, et elle se coordonne avec la signalisation des GTPases de la famille Rho et les voies d’adhérence pour réguler la morphogenèse et le trafic intracellulaire. Par son rôle dans l’organisation des réseaux d’actine, ACTR2 influence des processus tels que la motilité des cellules immunitaires, le remodelage de la barrière épithéliale et le transport vésiculaire, ce qui le rend pertinent pour l’étude de l’invasion, des phénotypes associés aux métastases, ainsi que des dysfonctionnements neurodéveloppementaux ou du cytosquelette. Des perturbations des voies d’assemblage de l’actine sont fréquemment observées dans les cancers et les contextes inflammatoires, et ACTR2 constitue un point d’entrée mécanistique pour disséquer ces changements liés au cytosquelette.

Arp2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACTR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Arp2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACTR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACTR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Arp2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACTR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Arp2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Arp2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ACTR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.