ARP-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-405241-LAC

NR2F2 codifica a ARP-1 (também conhecida como COUP-TFII), um receptor nuclear órfão que atua como um fator de transcrição específico de sequência, regulando decisões de destino celular e programas gênicos específicos de tecidos. A ARP-1 integra-se à sinalização de receptores nucleares para modular a atividade de enhancers e promotores, influenciando processos como angiogênese, desenvolvimento de órgãos, regulação metabólica e transições epitélio–mesênquima. Por meio de controle transcricional dependente do contexto, o NR2F2 participa de vias que moldam a biologia vascular e o padrão de desenvolvimento, e tem sido associado na literatura a anomalias congênitas e a estados de diferenciação desregulados relevantes para a biologia do câncer. Essas características tornam o NR2F2 um alvo útil para o estudo de redes transcricionais, expressão gênica regulada pela cromatina e especificação de linhagem em células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ARP-1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de NR2F2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais ARP-1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição NR2F2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de ARP-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo NR2F2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.