AROS-29 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-412385

概要

TMEM161Aは、細胞内膜に局在する多回膜貫通型タンパク質AROS-29をコードしており、上皮細胞をはじめとする体細胞種において、膜構造の組織化や恒常性維持に関わるシグナル伝達に寄与すると考えられています。分子パートナーは依然として十分に解明されていないものの、TMEM161Aはオルガネラの完全性、細胞ストレス応答、ならびに膜輸送やプロテオスタシスと交差する増殖関連経路の制御に関与する過程と関連付けられてきました。発現データや遺伝学的関連解析により、TMEM161Aが上皮機能や炎症感受性に影響する形質と結び付けられていることが示されており、組織維持における役割の継続的な検討を支持しています。AROS-29の生物学を解明することは、膜に埋め込まれた制御因子がシグナル伝達の忠実性や、複雑な疾患機構に関わる細胞状態遷移にどのように影響するかを明らかにする助けとなります。

AROS-29 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTMEM161A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TMEM161A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TMEM161Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AROS-29タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AROS-29シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TMEM161A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AROS-29の機能に不可欠なTMEM161Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TMEM161Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AROS-29 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAROS-29 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TMEM161A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AROS-29 HDRプラスミド（h）および AROS-29 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTMEM161Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTMEM161A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。