Arnt 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403101-ACT

ARNT2 (translocador nuclear do receptor de hidrocarbonetos arílicos 2) codifica um fator de transcrição bHLH-PAS (hélice–alça–hélice básico com domínio PAS) que forma heterodímeros com parceiros contendo domínio PAS para acoplar sinais ambientais e de desenvolvimento a programas de expressão gênica. Como translocador nuclear, o ARNT2 participa de redes transcricionais responsivas ao oxigênio e a xenobióticos, integrando sinalizações que moldam a diferenciação neuronal, a adaptação metabólica e as respostas celulares ao estresse. A transcrição regulada por ARNT2 está ligada a vias que governam a expressão gênica responsiva à hipóxia e o padrão do neurodesenvolvimento, com relevância para distúrbios que envolvem regulação gênica neural e sinalização de estresse alteradas. A atividade desregulada de ARNT2 também tem sido estudada no contexto de reprogramação de vias no câncer e em outras doenças nas quais o controle transcricional bHLH-PAS influencia o estado celular e programas de sobrevivência.

Arnt 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARNT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Arnt 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARNT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARNT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Arnt 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARNT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Arnt 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Arnt 2 em células tumorais com expressão de ARNT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.