Arnt 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401039-ACT

ヒトARNT（aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator；HIF-1β）は、AHRやHIF-1α／HIF-2αなどのパートナーとヘテロ二量体を形成し、刺激依存的な遺伝子発現プログラムを協調的に制御するbHLH-PAS型転写因子をコードします。ARNTを含む複合体は、異物応答シグナル伝達、低酸素への細胞適応、血管新生および代謝に関わる転写ネットワーク、ならびに増殖や分化に影響するより広範なストレス応答経路を制御します。これらの役割を通じて、ARNTは環境曝露が転写制御の再編成につながる文脈や、低酸素シグナルおよびAHR経路活性が細胞状態と遺伝子発現の変化に寄与する疾患関連モデルにおいて、頻繁に研究されています。PASファミリー転写回路の中心的な位置づけにより、ARNTは経路間クロストークや転写制御機構を解析するうえで有用な結節点となります。

Arnt 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARNTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Arnt 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARNT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARNT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Arnt 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARNT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるArnt 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARNT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるArnt 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。