ARL15 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412313

Descripción general

ARL15 (GTPasa 15 similar al factor de ADP-ribosilación, ARF) es una pequeña GTPasa de la familia ARF implicada en la regulación del tráfico intracelular de membranas y de la señalización asociada a orgánulos, procesos que influyen en el reciclaje de receptores, la dinámica endosomal y el manejo de lípidos específico de cada compartimento. A través de estas funciones, ARL15 está en posición de afectar el metabolismo celular y las vías de transducción de señales que dependen del transporte vesicular y de la composición de la membrana plasmática. Estudios genéticos en humanos han asociado loci de ARL15 con rasgos cardiometabólicos, incluidos fenotipos relacionados con la adiposidad y la insulina, lo que respalda investigar ARL15 en la homeostasis metabólica y en la biología de enfermedades relacionadas. Por lo tanto, su expresión y actividad pueden aprovecharse para explorar cómo la señalización de GTPasas vinculada al tráfico se integra con respuestas endocrinas y programas celulares dependientes de nutrientes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ARL15 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ARL15 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ARL15 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ARL15 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ARL15.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ARL15 para la investigación de la señalización de ARL15, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ARL15 críticos para la función de ARL15
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ARL15 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ARL15 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ARL15 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ARL15. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ARL15 (h) y el plásmido HDR ARL15 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ARL15 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ARL15 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.