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ARHGAP21CRISPR激活质粒(h) | sc-403424-ACT | 20 µg | $397.00 |
ARHGAP21 编码一种 Rho GTP 酶激活蛋白(RhoGAP),可加速 Rho 家族 GTP 酶的 GTP 水解,从而帮助协调肌动蛋白细胞骨架重塑、细胞极性以及膜运输。通过调控 RhoA/Cdc42/Rac 信号通路,ARHGAP21 影响细胞迁移、黏附动态以及与高尔基体相关的运输等过程,将细胞骨架组织与细胞内运输通路连接起来。Rho GTP 酶信号异常被广泛认为与癌细胞侵袭、转移行为以及血管与炎症相关表型有关,因此 ARHGAP21 是研究疾病相关情境下通路重塑的一个有用节点。研究者常在细胞骨架失调模型、上皮-间质转化(EMT)程序以及影响增殖与运动性的信号串扰研究中探究 ARHGAP21 的功能。
ARHGAP21 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ARHGAP21的表达。
ARHGAP21 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ARHGAP21基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ARHGAP21转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ARHGAP21表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ARHGAP21位点,并能够研究内源性位点上依赖于ARHGAP21的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ARHGAP21表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ARHGAP21通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。