ARH1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419017

Descripción general

Adprh codifica ARH1 (hidrolasa 1 de ADP-ribosilarginina), una enzima citosólica que hidroliza la mono-ADP-ribosa unida a arginina en proteínas y ayuda a mantener la homeostasis de la ADP-ribosilación. Al revertir la mono-ADP-ribosilación, ARH1 influye en la señalización del estrés y del daño en el ADN, en las vías de la inmunidad innata y en la regulación de la función proteica mediante el recambio de modificaciones postraduccionales. La alteración del metabolismo de la ADP-ribosa se ha relacionado con respuestas inflamatorias modificadas, defectos en el mantenimiento del genoma y programas de supervivencia celular desregulados. En modelos de ratón, Adprh ofrece un punto de entrada manejable para investigar cómo la ADP-ribosilación reversible de arginina modela la resiliencia celular y fenotipos relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ARH1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Adprh en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Adprh junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Adprh tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ARH1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Adprh para la investigación de la señalización de ARH1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Adprh críticos para la función de ARH1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Adprh para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ARH1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ARH1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Adprh. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ARH1 (m) y el plásmido HDR ARH1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Adprh para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Adprh definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.