ARF3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402706-ACT

ADPリボシル化因子3（ARF3）はARFファミリーに属する小型GTPアーゼで、GDP結合状態とGTP結合状態の間を循環することで膜輸送を制御し、小胞の出芽、被覆タンパク質のリクルート、リン脂質代謝を調節します。ARF3はゴルジ体およびエンドソームの輸送ダイナミクスに寄与し、カーゴの選別、分泌、受容体リサイクリングに影響を与えることで、シグナル伝達や細胞表面の構成を形作ります。細胞内輸送と細胞骨格の協調における役割を通じて、ARF3活性の変化は増殖、遊走、ストレス応答などの過程に影響し得ます。ARFを介した輸送の破綻は、がんや神経系の文脈で疾患関連の表現型と関連付けられており、ARF3は異常な細胞内ロジスティクスを研究するための機構的な結節点として位置付けられます。

ARF3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARF3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ARF3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARF3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARF3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ARF3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARF3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるARF3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARF3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるARF3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。