Aquaporin 2/AQP2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400402

Descripción general

AQP2 codifica la acuaporina-2, un canal de agua regulado por vasopresina que controla la reabsorción osmótica de agua en las células principales del túbulo colector renal. En respuesta a la señalización AVPR2–cAMP–PKA, AQP2 experimenta un tráfico dependiente de fosforilación hacia la membrana apical, coordinándose con el reciclaje endocítico y la dinámica del citoesqueleto para ajustar la permeabilidad de la membrana al agua. Esta vía integra el control hormonal del equilibrio hídrico con la polaridad epitelial y los procesos de transporte de membrana. La desregulación de la expresión, la localización o la compuerta (gating) de AQP2 se asocia con una capacidad disminuida para concentrar la orina y constituye un nodo mecanístico en estudios de la homeostasis del agua y la disfunción tubular renal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 2/AQP2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AQP2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AQP2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AQP2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Aquaporin 2/AQP2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AQP2 para la investigación de la señalización de Aquaporin 2/AQP2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de AQP2 críticos para la función de Aquaporin 2/AQP2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AQP2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Aquaporin 2/AQP2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Aquaporin 2/AQP2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AQP2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Aquaporin 2/AQP2 (h) y el plásmido HDR Aquaporin 2/AQP2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AQP2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AQP2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.