apoC-III Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403887-ACT

O APOC3 humano codifica a apolipoproteína C-III (apoC-III), uma apolipoproteína secretada que modula o metabolismo de lipoproteínas ricas em triglicerídeos ao limitar a hidrólise mediada pela lipoproteína lipase e ao atrasar a depuração hepática de partículas remanescentes. Por meio de seus efeitos no tráfego de VLDL e de remanescentes de quilomícrons, a apoC-III influencia vias de transporte de lipídios e a homeostase energética sistêmica. A expressão alterada de APOC3 está associada a fenótipos de dislipidemia caracterizados por triglicerídeos plasmáticos elevados e mudanças em perfis de lipoproteínas aterogênicas, sustentando seu uso como um nó mecanístico para estudar a biologia do risco cardiometabólico. Em modelos celulares, a regulação de APOC3 pode ser examinada em conjunto com o controle transcricional de programas hepáticos de manejo de lipídios e com o processamento de apolipoproteínas na via secretória.

apoC-III O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APOC3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

apoC-III O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APOC3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APOC3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de apoC-III. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APOC3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de apoC-III no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via apoC-III em células tumorais com expressão de APOC3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.