APOBEC3G Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402769-ACT

A APOBEC3G humana é uma desaminase de citidina que restringe retrovírus e retrotransposons ao introduzir edições de C para U em DNA de fita simples durante a transcrição reversa, promovendo mutagênese letal dos genomas virais. Ela atua na imunidade inata intrínseca e se conecta a programas de genes estimulados por interferon e a vias de detecção de ácidos nucleicos que moldam a defesa antiviral. A atividade da APOBEC3G é antagonizada por fatores virais como o Vif do HIV-1, tornando sua regulação um ponto central em estudos de interações hospedeiro–patógeno e evolução viral. A atividade desregulada de desaminases da família APOBEC também tem sido associada à instabilidade genômica e a assinaturas de mutação relevantes para a biologia do câncer e contextos inflamatórios.

APOBEC3G O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APOBEC3G sem alterar a sequência de ADN subjacente.

APOBEC3G O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APOBEC3G em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APOBEC3G, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de APOBEC3G. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APOBEC3G nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de APOBEC3G no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via APOBEC3G em células tumorais com expressão de APOBEC3G silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.