Ape2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407307

Visão geral

O APEX2 humano codifica a endonuclease apurínica/apirimidínica 2 (Ape2), uma nuclease que reconhece sítios abásicos e participa do reparo por excisão de bases do DNA e da manutenção do genoma. A Ape2 contribui para o processamento de extremidades de DNA danificadas e sustenta respostas celulares a lesões oxidativas e associadas à replicação, vinculando sua atividade ao gerenciamento do estresse replicativo e à sinalização de checkpoints. Ao influenciar o acúmulo e a resolução de danos ao DNA, a função de APEX2 é relevante para mecanismos subjacentes à mutagênese e à instabilidade cromossômica observadas no câncer e em outros distúrbios associados à capacidade reduzida de reparo do DNA. Como resultado, o APEX2 é frequentemente estudado em contextos como a comunicação cruzada na resposta a danos no DNA, a biologia do estresse oxidativo e a escolha de vias de reparo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Ape2 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene APEX2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do APEX2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do APEX2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Ape2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de APEX2 para a investigação da sinalização de Ape2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) APEX2 críticos para a função Ape2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos APEX2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Ape2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Ape2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus APEX2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Ape2 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Ape2 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia APEX2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo APEX2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.