APC8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406761

概要

CDC23は、有糸分裂の進行と細胞周期からの退出を、セキュリンやサイクリンなどの主要な制御因子をプロテアソーム分解へ導くことで統括するE3ユビキチンリガーゼ「後期促進複合体／サイクロソーム（APC/C）」の中核サブユニットであるAPC8をコードします。APC8はAPC/Cの組み立てと基質認識に寄与し、チェックポイントのシグナルを統合することで、姉妹染色分体の正確な分離とゲノム安定性の維持を保証します。ユビキチン介在性プロテオリシスにおける役割を通じて、CDC23は紡錘体チェックポイント制御、有糸分裂のタイミング、そしてG2/M期から後期（アナフェーズ）への秩序だった移行を司る経路と結び付いています。APC/C構成因子や関連する細胞周期制御機構の破綻は、増殖性疾患や異数性に関連する表現型にしばしば関与するため、CDC23/APC8は細胞分裂異常の機構研究における重要な標的となります。

APC8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDC23遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDC23内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDC23のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、APC8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、APC8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDC23欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• APC8の機能に不可欠なCDC23エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDC23ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• APC8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAPC8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDC23遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  APC8 HDRプラスミド（h）および APC8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDC23ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDC23標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。