AP-3β Lentiviral Activation Particles (m): sc-419135-LAC
- 対象生物種: mouse
- 200 µl のトランスフェクション準備済み、 高力価な CRISPR/dCas9 Lentiviral Activation Particles
- AP-3β Lentiviral Activation Particles (m)は、細胞のレンチウイルストランスダクションを経由して、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
- AP-3β Lentiviral Activation Particles (m)は、以下のSAM Activation elementsを含めます：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A and H840A)をコード化したのプラスミド、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド、目標特異的な20ntガイドRNA（gRNA）をコード化したのプラスミド。ブラストサイジン、ハイグロマイシンおよびピューロマイシン耐性遺伝子も含めます。
- 導入の際に、SAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
- AP-3β レンチウイルス活性化プラスミド (m) および AP-3β レンチウイルス活性化プラスミド (m2) によってコードされる gRNA は、Ap3b1 プロモーターの異なる調節領域を標的としています。いずれか一方、または両方のデザインが利用可能である可能性があります
- トランスフェクションの後、遺伝子活性化効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: AP-3β 抗体 (3B4): sc-517083
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
AP-3β Lentiviral Activation Particles (m) | sc-419135-LAC | 200 µl | $455.00 |
Ap3b1は、アダプタータンパク質3（AP-3）複合体のβ1サブユニットをコードしており、trans-ゴルジネットワークおよびエンドソーム区画からリソソームやリソソーム関連小器官へ向かう輸送において、積み荷（カーゴ）の選別と輸送を仲介する主要なコートアダプターです。AP-3βは、小胞の形成（生合成）、小器官の成熟、調節性分泌に関与する膜タンパク質のソーティングを支え、特殊化した細胞におけるエンドリソソーム輸送やシナプス小胞サイクルなどの経路に影響を与えます。AP-3複合体機能の破綻は小胞輸送を乱し、モデル系では色素異常、神経発達に関わる表現型、免疫細胞の顆粒機能の変化と関連づけられてきました。このため、Ap3b1は細胞内輸送、小器官の同一性（アイデンティティ）、および細胞種特異的なカーゴ輸送経路の機構を研究するうえで広く解析されています。
AP-3β レンチウイルス活性化粒子（m）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なAp3b1の発現上昇を可能にします。
AP-3β レンチウイルス活性化粒子（m）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、Ap3b1転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性AP-3βの発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のAp3b1ゲノム座および制御機構を維持します。
レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。