AP-3β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419135
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- AP-3β El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico AP-3β, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AP-3β Anticuerpo (3B4): sc-517083
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
AP-3β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419135 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Ap3b1 codifica la subunidad β de AP-3 en ratón, un componente central del complejo de proteínas adaptadoras 3, que reconoce motivos de clasificación de carga y dirige el tráfico vesicular desde los endosomas y la red trans-Golgi hacia los lisosomas y los orgánulos relacionados con lisosomas. El tráfico dependiente de AP-3 favorece la entrega de proteínas de membrana, la biogénesis de orgánulos y las vías de secreción regulada, fundamentales para la fisiología de neuronas y células inmunitarias. La alteración de la función del complejo AP-3 se ha asociado con defectos en la clasificación de proteínas de vesículas sinápticas y con cambios en la homeostasis endolisosomal, lo que aporta una conexión mecanística con los fenotipos neurodel desarrollo e inmunológicos observados cuando se perturba la vía de AP-3.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO AP-3β (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ap3b1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ap3b1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ap3b1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AP-3β.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ap3b1 para la investigación de la señalización de AP-3β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ap3b1 críticos para la función de AP-3β
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ap3b1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido AP-3β CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido AP-3β CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ap3b1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AP-3β (m) y el plásmido HDR AP-3β (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ap3b1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ap3b1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.