ANP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400723-ACT

NPPA codifica per il peptide natriuretico atriale (ANP), un fattore endocrino di origine cardiaca che viene sintetizzato come prepro-ormone e poi processato per regolare il volume dei liquidi extracellulari e il tono vascolare. L’ANP segnala principalmente attraverso il recettore dei peptidi natriuretici di tipo A (NPR1/GC-A), aumentando il cGMP e attivando vie dipendenti da PKG che modulano la gestione renale del sodio, la vasodilatazione e l’equilibrio neuro-ormonale. Nei cardiomiociti, l’espressione di NPPA è regolata dinamicamente dallo stress meccanico e dai programmi di rimodellamento, collegando l’ANP alla segnalazione ipertrofica, a reti trascrizionali associate alla fibrosi e all’adattamento emodinamico. Un’alterata attività NPPA/ANP è comunemente studiata nel contesto di insufficienza cardiaca, ipertensione e fenotipi cardiometabolici, in cui la segnalazione dei peptidi natriuretici e l’omeostasi del cGMP risultano perturbate.

ANP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NPPA senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ANP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NPPA nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NPPA, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ANP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NPPA nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ANP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ANP nelle cellule tumorali con espressione di NPPA silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.