Partículas Lentivirales de Activación (m) ANO2: sc-433990-LAC

Ano2 codifica ANO2 (TMEM16B), un canal de cloruro activado por calcio expresado predominantemente en neuronas y epitelios sensoriales, donde modula la excitabilidad de la membrana y la señalización evocada por estímulos. Al acoplar la dinámica intracelular de Ca²⁺ al flujo de Cl⁻, ANO2 contribuye a procesos como los patrones de disparo de potenciales de acción, la integración sináptica y la transducción sensorial, incluidos los circuitos olfatorios y retinianos. La actividad del canal se integra con redes de señalización dependientes de Ca²⁺ y con la homeostasis iónica que influyen en la capacidad de respuesta neuronal y en el comportamiento de las redes. La alteración de la función de ANO2 se ha investigado en el contexto de fenotipos de procesamiento sensorial y mecanismos relacionados con la excitabilidad, relevantes para la investigación en neurobiología.

Las partículas de activación lentiviral ANO2 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Ano2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral ANO2 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Ano2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de ANO2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Ano2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.