Annexin-2/ANXA2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400296-ACT

O gene humano ANXA2 codifica a anexina A2, uma proteína de ligação a fosfolipídios dependente de Ca²⁺ que se associa à S100A10 para regular a organização de membranas, a endocitose e a dinâmica do citoesqueleto de actina. A anexina A2 coordena a geração de plasmina e a atividade fibrinolítica na superfície celular, influenciando a remodelação da matriz extracelular, a migração celular e processos angiogênicos. Ela participa do tráfego de vesículas e de eventos de sinalização ligados a respostas inflamatórias e ao estresse oxidativo, e pode modular a ativação do plasminogênio e a localização de proteases. Expressão ou localização desregulada de ANXA2 foi relatada em múltiplos tipos de câncer e em patologias vasculares e inflamatórias, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de invasão, programas associados à metástase e biologia relacionada à trombose.

Annexin-2/ANXA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANXA2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Annexin-2/ANXA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANXA2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANXA2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Annexin-2/ANXA2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANXA2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Annexin-2/ANXA2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Annexin-2/ANXA2 em células tumorais com expressão de ANXA2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.