ANKTM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435491-ACT

O gene Trpa1 de camundongo codifica ANKTM1 (TRPA1), um canal catiônico não seletivo da família dos receptores de potencial transitório, enriquecido em neurônios sensoriais e em outros tipos celulares que detectam irritantes químicos, estresse oxidativo e sinais relacionados à temperatura. A abertura do canal promove influxo de Ca2+, que se acopla à inflamação neurogênica e à sinalização associada à dor por meio de vias dependentes de cálcio, cascatas de MAPK e programas transcricionais a jusante. A atividade de ANKTM1 integra-se à detecção de eletrófilos reativos e a processos regulados por redox, influenciando respostas celulares a lesão tecidual e a mediadores inflamatórios. Alterações na sinalização de TRPA1 têm sido associadas a modelos de dor neuropática, prurido, irritação das vias aéreas e hipersensibilidade inflamatória, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de circuitos somatossensoriais e inflamatórios.

ANKTM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Trpa1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ANKTM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Trpa1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Trpa1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ANKTM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Trpa1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ANKTM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ANKTM1 em células tumorais com expressão de Trpa1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.