ANKTM1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402245-ACT

O TRPA1 humano (também conhecido como ANKTM1) codifica um canal catiônico não seletivo, permeável ao cálcio, da subfamília ankyrin dos canais de potencial receptor transitório, que funciona como um sensor polimodal de eletrófilos reativos, sinais de estresse oxidativo e estímulos relacionados à temperatura. O influxo de Ca²⁺ mediado por TRPA1 conecta irritantes ambientais e endógenos à excitabilidade neuronal, à inflamação neurogênica e à sinalização a jusante por MAPK, NF-κB e programas transcricionais dependentes de Ca²⁺. O canal é amplamente estudado em neurônios sensoriais e tecidos periféricos, onde modula a nocicepção, a tosse e os reflexos das vias aéreas, e as respostas inflamatórias. A atividade desregulada de TRPA1 tem sido implicada em mecanismos relevantes para estados de dor crônica, enxaqueca, asma e hipersensibilidade das vias aéreas, e para a biologia de doenças inflamatórias, sustentando seu uso em genômica funcional focada em vias.

ANKTM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRPA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ANKTM1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRPA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRPA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ANKTM1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRPA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ANKTM1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ANKTM1 em células tumorais com expressão de TRPA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.