ANKRD50 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412772-ACT

O ANKRD50 humano codifica uma proteína contendo repetições de anquirina, implicada no tráfego endossomal e na triagem de proteínas de membrana, apoiando o controle espacial de receptores de sinalização e de transportadores. Funções descritas associam o ANKRD50 a redes regulatórias ligadas aos endossomos que influenciam a reciclagem de receptores, a dinâmica vesicular e o ajuste fino de vias downstream, incluindo processos que modulam as respostas de sinalização de fatores de crescimento e do sistema imune. Por meio desses papéis, o ANKRD50 é relevante para estudos de homeostase celular, proteostase e fidelidade da transdução de sinais em contextos diferenciados e proliferativos. Alterações no tráfego do sistema endomembranar são uma característica comum em múltiplos mecanismos de doença, tornando o ANKRD50 um alvo útil para dissecar como perturbações no tráfego remodelam estados de sinalização celular.

ANKRD50 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANKRD50 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ANKRD50 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANKRD50 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANKRD50, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ANKRD50. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANKRD50 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ANKRD50 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ANKRD50 em células tumorais com expressão de ANKRD50 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.