ANKRD22 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424577

Panoramica

Ankrd22 codifica ANKRD22, una proteina contenente ripetizioni di anchirina implicata nelle interazioni proteina–proteina che possono influenzare la segnalazione cellulare e i programmi di adattamento allo stress. Studi di profilazione dell’espressione hanno collegato ANKRD22 allo stato metabolico e alla regolazione tessuto-specifica, suggerendo un ruolo in vie che coordinano l’equilibrio energetico con segnali di crescita e sopravvivenza. Nei sistemi dei mammiferi, le proteine con ripetizioni di anchirina interagiscono frequentemente con i processi di turnover dipendenti dall’ubiquitina, con l’organizzazione del citoscheletro e con il controllo trascrizionale, rendendo Ankrd22 rilevante per analizzare reti regolatorie dipendenti dal contesto. Alterazioni dell’espressione di ANKRD22 sono state riportate in dataset associati a patologie, supportandone l’impiego come nodo molecolare per studi meccanicistici sulla disregolazione del metabolismo e della segnalazione proliferativa in vivo e in modelli cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ANKRD22 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ankrd22 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ankrd22 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ankrd22 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ANKRD22.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ankrd22 per lo studio della segnalazione di ANKRD22, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ankrd22 critici per la funzione di ANKRD22
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ankrd22 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ANKRD22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ANKRD22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ankrd22. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ANKRD22 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ANKRD22 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ankrd22 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ankrd22 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.