Aldolase A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419082

概要

Aldoaは、解糖系酵素であるアルドラーゼAをコードしており、フルクトース-1,6-ビスリン酸をグリセルアルデヒド-3-リン酸とジヒドロキシアセトンリン酸に可逆的に分解する反応を触媒します。これにより、グルコースの利用がATP産生および生合成前駆体の生成と結び付けられます。マウス細胞では、アルドラーゼAは解糖系を介した代謝フラックスを支え、酸化還元バランスや細胞増殖に影響する、より広範な炭素代謝プログラムとも連動します。代謝機能に加えて、アルドラーゼAはアクチンダイナミクスとの相互作用を通じて細胞骨格の構築にも関与するとされ、エネルギー産生と細胞形態・運動性を結び付けます。ALDOAの発現変動や解糖系のリプログラミングは、代謝ストレスや疾患関連表現型（腫瘍に伴う代謝適応や筋機能の障害など）の文脈でしばしば研究されています。

Aldolase A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAldoa遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Aldoa内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Aldoaのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Aldolase Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Aldolase Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Aldoa欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Aldolase Aの機能に不可欠なAldoaエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Aldoaゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Aldolase A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAldolase A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Aldoa遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Aldolase A HDRプラスミド（m）および Aldolase A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAldoaホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAldoa標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。