Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402168-NIC

ALDH3A1 codifica l'aldeide deidrogenasi 3A1, un enzima citosolico NAD(P)+-dipendente che ossida aldeidi alifatiche e aromatiche reattive nei corrispondenti acidi carbossilici. Detossificando i sottoprodotti della perossidazione lipidica e le aldeidi esogene, ALDH3A1 sostiene l'omeostasi redox, limita la formazione di addotti aldeide-proteina e contribuisce alla difesa cellulare contro lo stress ossidativo ed elettrofilo. La sua attività si inserisce in un quadro più ampio che comprende il metabolismo delle aldeidi, le reti antiossidanti dipendenti dal glutatione e i programmi trascrizionali di risposta allo stress. Alterazioni dell'espressione o della funzione di ALDH3A1 sono state investigate in contesti che includono l'adattamento allo stress epiteliale, il danno associato all'infiammazione e il rimodellamento metabolico legato alla carcinogenesi.

Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ALDH3A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ALDH3A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ALDH3A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ALDH3A1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.