Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400782-NIC

A ALDH1A1 humana codifica uma aldeído desidrogenase citosólica dependente de NAD(P)+ que oxida aldeídos endógenos e xenobióticos aos seus correspondentes ácidos carboxílicos, contribuindo para a desintoxicação celular e para a homeostase redox. Ela desempenha um papel central no metabolismo de retinoides ao converter retinaldeído em ácido retinoico, vinculando a atividade da ALDH1A1 a programas transcricionais que influenciam a diferenciação e as respostas ao estresse. A expressão e a atividade enzimática da ALDH1A1 são frequentemente usadas como leituras funcionais em estudos de biologia epitelial e plasticidade celular, e sua regulação alterada tem sido associada à adaptação metabólica e ao manejo do estresse oxidativo em contextos de doença. Essas propriedades fazem da ALDH1A1 um alvo amplamente estudado em vias que controlam a depuração de aldeídos, a sinalização por ácido retinoico e a resiliência celular.

Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ALDH1A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ALDH1A1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ALDH1A1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ALDH1A1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.