ALAS-E Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403752

Visão geral

ALAS2 codifica a 5-aminolevulinato sintase específica da linhagem eritroide (ALAS-E), uma enzima mitocondrial dependente de fosfato de piridoxal que catalisa a primeira etapa — e etapa limitante da velocidade — da biossíntese do heme, ao condensar glicina e succinil‑CoA para formar 5‑aminolevulinato. Sua atividade integra o metabolismo mitocondrial à diferenciação eritroide e à hemoglobinização, sustentando a utilização de ferro e a produção de porfirinas em eritrócitos em desenvolvimento. A ALAS-E é regulada por programas transcricionais eritroides e pela disponibilidade de heme/ferro, conectando-a a vias que controlam a função mitocondrial e o estresse oxidativo em eritroblastos. Alterações genéticas ou funcionais em ALAS2 estão associadas a distúrbios na síntese de porfirinas/heme e podem ser investigadas em modelos de maturação eritroide e de fisiopatologia das hemácias.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ALAS-E (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ALAS2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ALAS2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ALAS2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ALAS-E.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ALAS2 para a investigação da sinalização de ALAS-E, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ALAS2 críticos para a função ALAS-E
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ALAS2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ALAS-E Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ALAS-E Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ALAS2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ALAS-E Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ALAS-E (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ALAS2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ALAS2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.