Akt2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400060-ACT

AKT2 codifica a quinase serina/treonina Akt2, um efetor central da sinalização dependente de PI3K que acopla a estimulação por fatores de crescimento ao metabolismo, à sobrevivência e à proliferação celular. A Akt2 fosforila substratos que regulam a captação de glicose, a síntese de glicogênio, o metabolismo lipídico e a progressão do ciclo celular, com papéis de destaque na sinalização da insulina e no controle da via mTOR. Na biologia humana, alterações na atividade de AKT2 têm sido associadas à desregulação da homeostase metabólica e a circuitos de sinalização oncogênicos que moldam o crescimento celular e a resistência ao estresse. Como um nó de via que integra entradas de receptores tirosina-quinase com programas transcricionais e metabólicos a jusante, AKT2 é amplamente estudado em modelos de resistência à insulina, biologia de adipócitos e sinalização em células tumorais.

Akt2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AKT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Akt2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AKT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AKT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Akt2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AKT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Akt2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Akt2 em células tumorais com expressão de AKT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.