Akp-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419070

Visão geral

Alppl2 codifica a isoforma de fosfatase alcalina murina Akp-5, uma ectoenzima ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que desfosforila nucleotídeos extracelulares e outros fosfomonoésteres na superfície celular. Ao regular a disponibilidade local de fosfato e intermediários da sinalização purinérgica, a Akp-5 pode influenciar processos metabólicos associados à membrana, programas de diferenciação epitelial e sinais do microambiente que afetam as interações célula–célula. A expressão de Alppl2 já foi relatada em contextos ligados ao estado de desenvolvimento e à identidade de linhagem, tornando-o útil como marcador e como nó funcional em estudos de diferenciação e remodelamento tecidual. A atividade de fosfatase alcalina desregulada é frequentemente investigada em relação a alterações na maturação celular e em respostas ao estresse, o que sustenta a pesquisa de Alppl2 em modelos de controle anormal do crescimento e de fenótipos relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Akp-5 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Alppl2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Alppl2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Alppl2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Akp-5.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Alppl2 para a investigação da sinalização de Akp-5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Alppl2 críticos para a função Akp-5
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Alppl2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Akp-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Akp-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Alppl2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Akp-5 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Akp-5 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Alppl2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Alppl2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.