Akp-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419069

Visão geral

Akp3 codifica a fosfatase alcalina 3 de camundongo (Akp-3), uma ectoenzima ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) que hidrolisa monoésteres de fosfato na superfície celular e em compartimentos extracelulares. Ao desfosforilar nucleotídeos e outros fosfometabólitos, a Akp-3 pode influenciar a disponibilidade local de fosfato, o tônus da sinalização purinérgica e uma homeostase metabólica mais ampla. A atividade de fosfatase alcalina é comumente associada à diferenciação epitelial e a funções de barreira e absorção específicas de tecidos, dando suporte a estudos de fisiologia de órgãos e de programas de maturação celular. Alterações na expressão ou na atividade de fosfatase alcalina são frequentemente usadas como parâmetro de leitura em modelos de inflamação, desregulação metabólica e patologias associadas à diferenciação, tornando Akp3 um alvo relevante para investigação mecanística.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Akp-3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Akp3 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Akp3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Akp3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Akp-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Akp3 para a investigação da sinalização de Akp-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Akp3 críticos para a função Akp-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Akp3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Akp-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Akp-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Akp3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Akp-3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Akp-3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Akp3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Akp3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.