AIP5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403772-NIC

WWP1は、ヒトのE3ユビキチン‐タンパク質リガーゼAIP5をコードしており、HECTドメインをもつ酵素として多様な基質をユビキチン化し、タンパク質の安定性、細胞内輸送、シグナルの強度を調節します。AIP5はWWドメインによってPPxYモチーフを認識し、受容体近傍のシグナル伝達の制御や調節因子タンパク質の分解回転を含む、細胞増殖、極性、ストレス応答を制御する経路の微調整に寄与します。WWP1/AIP5活性の破綻は、ユビキチン恒常性の変化や異常なシグナルプログラムと関連づけられており、がん化や発生表現型に関与することが示唆されています。そのためWWP1は、ユビキチン媒介性プロテオスタシスがヒト細胞における増殖、遊走、ならびに経路の再配線とどのように結びつくかを解明する目的で、しばしば研究対象となっています。

AIP5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における WWP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、WWP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、WWP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、WWP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。