Plasmide Double Nickase (m) AIP4: sc-421158-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) AIP4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AIP4 Double Nickase (m) et le plasmide AIP4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Itch. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) AIP4 | sc-421158-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Itch code AIP4, une ligase E3 ubiquitine de type HECT qui catalyse le transfert d’ubiquitine afin de réguler le renouvellement des protéines, leur trafic intracellulaire et l’amplitude des signaux. AIP4 module des voies immunitaires et inflammatoires, notamment l’activation et la différenciation des lymphocytes T, et s’insère dans des réseaux de signalisation proximaux aux récepteurs tels que Notch et NF‑κB via un contrôle, dépendant de l’ubiquitination, d’adaptateurs et de récepteurs clés. En façonnant le tri et la dégradation dépendants de l’ubiquitine, ITCH influence l’apoptose, les réponses au stress cellulaire et le maintien de l’homéostasie immunitaire. Une activité ITCH/AIP4 dérégulée a été associée, dans des modèles expérimentaux, à des phénotypes de dérégulation immunitaire et à des sorties de signalisation altérées, pertinentes pour des processus inflammatoires et de type auto-immun.
AIP4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Itch dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Itch. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Itch. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Itch.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.