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AHCYL1CRISPR激活质粒(h) | sc-417109-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类基因 AHCYL1 编码腺苷同型半胱氨酸酶样蛋白 1(adenosylhomocysteinase-like 1),它是 S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的一个非催化性旁系同源蛋白,作为调控组分将转甲基化能力与细胞内信号传导连接起来。研究表明,AHCYL1 参与调节依赖肌醇 1,4,5-三磷酸受体(IP3R)的钙离子动态及其相关程序,例如内质网相关信号、代谢适应和应激反应。通过这些联系,AHCYL1 的表达可影响甲基化与 Ca²⁺ 响应通路下游的表观遗传与转录输出。甲基化平衡与 Ca²⁺ 信号的失调在炎症、神经生物学以及肿瘤发生等情境中常见,因此 AHCYL1 是在疾病相关细胞模型中开展机制研究的一个有用节点。
AHCYL1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性AHCYL1的表达。
AHCYL1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的AHCYL1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于AHCYL1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性AHCYL1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的AHCYL1位点,并能够研究内源性位点上依赖于AHCYL1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在AHCYL1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟AHCYL1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。