Ah Receptor Plasmide Double Nickase (h): sc-400297-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Ah Receptor Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Ah Receptor Double Nickase Plasmid (h) e il Ah Receptor Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AHR. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Ah Receptor Antibody (A-3): sc-133088
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Ah Receptor Plasmide Double Nickase (h) | sc-400297-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ah Receptor Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400297-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’AHR umano codifica il recettore degli idrocarburi arilici (Ah Receptor), un fattore di trascrizione attivato da ligando che rileva xenobiotici e metaboliti endogeni per regolare programmi di espressione genica che controllano la detossificazione, la funzione di barriera e la modulazione immunitaria. Dopo il legame con il ligando, AHR trasloca nel nucleo, eterodimerizza con ARNT e si lega agli elementi di risposta agli xenobiotici inducendo bersagli quali CYP1A1 e CYP1B1, intersecando le risposte allo stress ossidativo e la segnalazione infiammatoria. L’attività di AHR si integra con vie tra cui NF-κB, WNT/β-catenina e TGF-β, influenzando il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione e l’omeostasi tissutale. Una segnalazione di AHR deregolata è stata implicata, in modo dipendente dal contesto, nella biologia tumorale, in stati infiammatori cronici e in risposte alterate alle esposizioni ambientali, sostenendone l’utilità come nodo meccanicistico nella ricerca in tossicologia e immunologia.
Ah Receptor Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AHR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AHR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AHR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AHR interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.