Ah Receptor Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419054-ACT

Il gene murino **Ahr** codifica il recettore degli idrocarburi arilici (AhR), un fattore di trascrizione attivato da ligandi che rileva xenobiotici e metaboliti endogeni per regolare programmi di espressione genica che controllano la detossificazione, la funzione di barriera e la modulazione immunitaria. Una volta attivato, AhR trasloca nel nucleo, eterodimerizza con ARNT e si lega agli elementi di risposta agli xenobiotici per indurre bersagli quali **Cyp1a1/Cyp1b1**, integrandosi con vie dello stress ossidativo, della segnalazione infiammatoria e del metabolismo. L’attività di AhR influenza la differenziazione delle cellule T, la polarizzazione dei macrofagi, l’omeostasi epiteliale e reti trascrizionali associate al ritmo circadiano. Una segnalazione di AhR deregolata è stata collegata, in modelli murini sperimentali, a una suscettibilità alterata alle malattie infiammatorie, alle risposte ai tossici e alla biologia del microambiente tumorale.

Ah Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ahr senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ah Receptor Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ahr nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ahr, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ah Receptor. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ahr nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ah Receptor nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ah Receptor nelle cellule tumorali con espressione di Ahr silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.